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山梨醇麥康凱瓊脂 (Sorbitol MacConkey Agar)

培養(yǎng)大腸桿菌O157的選擇性培養(yǎng)基

山梨醇麥康凱瓊脂 CM0813

配方表：

C-T添加劑 SR0172E

制備方法：

取51.5g培養(yǎng)基至1L蒸餾水中，煮沸至完全溶解，121℃高壓滅菌15分鐘，冷卻至50℃，混勻倒入無菌培養(yǎng)皿。

如果需要的話，根據(jù)SR0172的產(chǎn)品說明進行溶解，每500ml培養(yǎng)基加入1瓶SR0172E，加入冷卻后的培養(yǎng)基中，混勻后再倒平板。

產(chǎn)品描述：

大腸桿菌O157被認為是出血性結(jié)腸炎的一個病因，是出血性腹瀉、嚴重的腹部疼痛、溶血性尿毒癥的病理特征菌。因此，它是一個特別重要的人病原體。

山梨醇麥康凱瓊脂可以用來提取病理大腸桿菌O157.它的配方是由Rappaport and Henig的描述基礎(chǔ)上而來，是根據(jù)3號麥康凱瓊脂改變的，將其中的乳糖變?yōu)榱松嚼娲?。大腸桿菌O157不發(fā)酵山梨醇，因此產(chǎn)生無色菌落。相比之下，大部分的大腸桿菌發(fā)酵山梨醇，形成粉色菌落。山梨醇麥康凱瓊脂的有效性被March and Ratnam做過確認實驗，他們的文章得出100%的靈敏度和85%的特異性，所以認為這款培養(yǎng)基是一款簡單地，不昂貴的，快速的，可信的大腸桿菌O157的篩選培養(yǎng)基。

Chapman等人在山梨醇麥康凱瓊脂中添加頭孢克肟和亞碲酸鉀，以增加培養(yǎng)基的選擇性。這種濃度的亞碲酸鉀將O157血清型與其他血清型區(qū)分出來，并抑制普羅威登斯菌和嗜水氣單胞菌，頭孢克肟抑制變形桿菌屬。

在山梨醇麥康凱瓊脂中添加頭孢克肟和亞銻酸鉀的方法再FDA 細菌學(xué)分析手冊中有描述。

培養(yǎng)基35℃培養(yǎng)24小時，避免過長時間的培養(yǎng)。

可使用大腸桿菌O157乳膠凝集試劑盒DR0620，來快速鑒定可疑的O157菌落。

保存：

干粉培養(yǎng)基10-30℃保存，SR0172在0℃以下保存，效期之前使用。制成培養(yǎng)基在2-8℃保存，避免光的照射，最多保存2周。

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山梨醇麥康凱瓊脂(含BCIG) CM0981

含有5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡萄糖苷酸(BCIG)

配方表：

制備方法：

取51.6g培養(yǎng)基至1L蒸餾水中，混勻，121℃高壓滅菌15分鐘，混勻倒入無菌培養(yǎng)皿。

產(chǎn)品描述：

含有BCIG的山梨醇麥康凱瓊脂（SMAC）含有兩種大腸桿菌O157的選擇性因子：對山梨醇的不發(fā)酵，β-葡萄糖苷酶的活性的出現(xiàn)。在一次對人工污染的肉類樣品的測試中，含有BCIG的SMAC將大腸桿菌O157的失敗檢出的概率下降了36%。

這款培養(yǎng)基中的5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡萄糖苷酸(BCIG)是β-葡萄糖苷酶的底物，這種酶并不在O157大腸桿菌中常見。非發(fā)酵山梨醇，以及β-葡萄糖苷酶陰性的大腸桿菌O157生成麥色菌落。具有β-葡萄糖苷酶的微生物將分解BCIG底物，形成吲哚酚（或鹵代酚），迅速形成不溶性染料或其類似物，導(dǎo)致明顯的藍綠色菌落。

在35-37℃培養(yǎng)24小時，查看麥色菌落，可以使用大腸桿菌O157乳膠凝集試劑盒DR0620或DR0102對可疑菌落進行確認。

大腸桿菌O157一般不發(fā)酵山梨醇，并且是β-葡萄糖苷酶陰性，因此形成無色菌落。大部分大腸桿菌其他血清型是β-葡萄糖苷酶陽性，可以發(fā)酵山梨醇，因此出現(xiàn)藍色至紫色菌落。

如果高含量的革蘭氏陰性菌需要被抑制，可以加入Cefixime-Tellurite (CT) Selective Supplement SR0172增加選擇性。

SMAC with BCIG是一種 USDA/FSIS 認可的培養(yǎng)基，用來預(yù)鑒定Escherichia coli O157:H7/NM

質(zhì)控菌株：

Escherichia coli O157:H7 (glucuronidase-negative) NCTC 12900    生長良好，無色菌落

Escherichia coli (glucuronidase-positive) ATCC? 25922           生長良好，藍色/紫色菌落

Enterococcus faecalis ATCC? 19433                               被抑制

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頭孢克肟鼠李糖山梨醇麥康凱瓊脂基礎(chǔ) CM1005

CR-SAMC Agar Base，與SR0191E配成CR-SAMC Agar

配方表：

SR0191E：每小瓶含0.025mg頭孢克肟，在每升培養(yǎng)基中加入0.05mg頭孢克肟。

制備方法：

取28.25g培養(yǎng)基至500ml蒸餾水中，混勻后121℃高壓滅菌15分鐘。冷卻到50℃，加入已經(jīng)按照說明書溶解的1瓶SR0191E（每小瓶加入2ml無菌水），混勻后倒平板。

產(chǎn)品描述：

在山梨醇麥康凱瓊脂SMAC中加入鼠李糖，增加了大腸桿菌O157在背景菌種的區(qū)分度。大約60%的不發(fā)酵山梨醇的大腸桿菌血清型（O157血清型除外）會發(fā)酵鼠李糖。頭孢克肟的存在降低了競爭菌的數(shù)量，特別是變形桿菌屬，它在非山梨醇發(fā)酵菌中經(jīng)常占了很大的比重。

大腸桿菌O157一般不發(fā)酵山梨醇和鼠李糖，所以產(chǎn)生麥色菌落。但是，大部分不發(fā)酵山梨醇的其他血清型大腸桿菌發(fā)酵鼠李糖，這些菌落為紅色或粉色。

CR-SCAM與選擇性更強的CT-SACM聯(lián)用，可以使增菌肉湯中的大腸桿菌O157的恢復(fù)率更高。

培養(yǎng)基在35-37℃培養(yǎng)24小時

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改良胰蛋白胨大豆肉湯 (Tryptone Soya Broth Modified, mTS)

用于培養(yǎng)大腸桿菌O157的選擇性增菌肉湯，可以添加合適的添加劑增加選擇性

改良胰蛋白胨大豆肉湯基礎(chǔ) CM0989

配方表：

SR0190A VCC選擇性添加劑：

SR0181E：每小瓶10mg萬古霉素，每小瓶配500ml培養(yǎng)基。

制備方法：

取33g改良TSB至1L蒸餾水中，混勻，分裝支最終容器中，121℃高壓滅菌15分鐘，冷卻至50℃后添加所需的添加劑。

產(chǎn)品描述：

mTSB是一種營養(yǎng)豐富的選擇性肉湯基礎(chǔ)，可以37℃震蕩培養(yǎng)24小時，也有人43℃攪拌培養(yǎng)，使食品樣品中的恢復(fù)率更佳。

緩沖蛋白胨水CM0509，添加SR0190，用來從牛肉的尸體，牛的糞便和牛奶和碎牛肉中提取大腸桿菌O157；

由SR0190E添加到CM0989中，組成EHEC enrichment broth (EEB)，克服了有些大腸桿菌O157的抗生素抗性。

Both BPW-VCC (CM0509+SR0190) and EEB (CM0989+SR0190) are incubated for 6hr at 37°C

Tryptone Soya Broth (CM0129)可以通過增加一些成分變?yōu)镃M0989，添加4g/L的磷酸二氫鉀，以及1.5g/L的膽鹽。膽鹽抑制孢子和腸球菌屬，但能使大腸桿菌O157生長。VCC選擇性添加劑含有三種抗生素，萬古霉素抑制革蘭氏陽性菌，頭孢克肟抑制變形桿菌，頭孢磺啶抑制假單胞菌。

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