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沙門氏菌/志賀氏菌初增菌肉湯

沙門氏菌是腸桿菌科中最重要的病原菌屬，它包括近2000個血清型。這個也是在標準中需要不同肉湯和多種選擇性培養(yǎng)基增菌的原因。沙門氏菌中毒居世界前列，檢查食品中的沙門氏菌極為重要。沙門氏菌常在未熟的禽肉和肉制品、污染和未消毒的牛奶、色拉甜點、雞蛋、桔汁中風(fēng)險較大。

志賀氏菌又稱痢疾桿菌，志賀氏菌引起的細菌性痢疾最為常見，是食品和飲用水重要的致病菌檢測指標。國標GB4789.5-2012中，將增菌方面改變?yōu)閰捬踉鼍昧酥举R氏菌為兼性厭氧菌的特點，在增菌過程中大大提高了選擇性。

緩沖蛋白胨水(Buffer Peptone Water)

緩沖蛋白胨水 CM1159

用在選擇性增菌肉湯之前的前增菌培養(yǎng)基，用于從食品中分離沙門氏菌

配方表：

*可根據(jù)標準所示性能自行調(diào)整配方

配制方法：

取20g到1L蒸餾水中，混勻，分裝到最終容器中， 121℃滅菌15分鐘，使用礦物質(zhì)含量低的蒸餾水這點非常重要。

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緩沖蛋白胨水（ISO） CM1049

無選擇性的前增菌肉湯，用于從食品或相關(guān)樣品中分離沙門氏菌，配方符合ISO6579：2002和GB

配方表：

 *可根據(jù)標準所示性能自行調(diào)整配方  ?相當于9g的十二水合磷酸氫二鈉

配制方法：

取20g到1L蒸餾水中，混勻，分裝到最終容器中， 121℃滅菌15分鐘。 

產(chǎn)品描述：

由于沙門氏菌在樣品中可能以很低的數(shù)量出現(xiàn)，或者以亞致死的受損狀態(tài)存在，因此需要在選擇性培養(yǎng)基之前對細胞進行修復(fù)和繁殖，使用前增菌肉湯提高樣品中沙門氏菌被恢復(fù)的幾率。

在ISO6579:2002+A1:2007中，該培養(yǎng)基用在elective enrichment in MKTTn Broth CM1048（加新生霉素添加劑SR0181E）和RVS肉湯培養(yǎng)基之前。

樣品加入緩沖蛋白胨水(ISO)中的體積比例是1:10，在轉(zhuǎn)移到選擇性增菌肉湯之前在37℃±0.1℃培養(yǎng)16-20小時。

干粉培養(yǎng)基在10-30℃保存，效期之前使用。

制成培養(yǎng)基可以在室溫下最多放置2周。

RV增菌肉湯和RVS增菌肉湯

Rappaport-Vassiliadis(RV)增菌肉湯 CM0669

用于分離沙門氏菌的選擇性增菌肉湯

配方表：

 *可根據(jù)操作標準自行調(diào)整配方

本款培養(yǎng)基極易吸食，應(yīng)對其進行防潮處理

配制方法：

添加30g 培養(yǎng)基至1L 蒸餾水中，均勻加熱至其完全溶解，將每10mL 培養(yǎng)基分裝至旋蓋試管中，115°C 高壓滅菌15 分鐘

產(chǎn)品描述：

RV增菌肉湯是根據(jù)van Schothorst and Renaud描述的配方制得，當從食品和環(huán)境樣品中分離沙門氏菌時可以作為選擇性增菌肉湯。它同樣也可以用來在不用前增菌的條件下分離人糞便的沙門氏菌，但培養(yǎng)體積必須小。

Oxoid的RV增菌肉湯中的蛋白胨為大豆蛋白胨，曾被報道說大豆蛋白胨可以促進沙門氏菌的生長。

技術(shù)指導(dǎo)：

食品和環(huán)境樣品：

1、配制緩沖蛋白胨水CM0509或者ISO緩沖蛋白胨水CM1049，配制225ml；

2、根據(jù)指導(dǎo)配制RV增菌肉湯CM0669；

3、加25g待測樣品至225ml緩沖蛋白胨水中，35℃培養(yǎng)16-20小時；

4、接種0.1ml的預(yù)增菌緩沖蛋白胨水培養(yǎng)基至10mlRV增菌肉湯中，42±1℃培養(yǎng)24-48小時；

5、將上述肉湯接涂布種到XLD培養(yǎng)基CM0469B中，同時接種到另一種瓊脂培養(yǎng)基中，35℃培養(yǎng)18-24小時；

6、培養(yǎng)獲得的沙門氏菌的典型菌落須用生物化學(xué)或者血清學(xué)的方法進行鑒定。

保存：

干粉培養(yǎng)基在10-30℃儲存，在保質(zhì)期內(nèi)使用

制成培養(yǎng)基置于2-8℃保存

外觀：

干粉培養(yǎng)基：灰綠色干粉。
制成培養(yǎng)基：藍色溶液。

注意：RV肉湯不應(yīng)用于傷寒沙門氏菌的培養(yǎng)

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Rappaport-Vassiliadis大豆蛋白胨肉湯 RVS  CM0866

用于分離沙門氏菌的緩沖、選擇性增菌肉湯

配方表：

 *可根據(jù)操作標準自行調(diào)整配方

配制方法：

將26.75g 肉湯溶于1 升蒸餾水中，加熱至完全溶解。分裝于旋蓋試管，每份10ml，115℃高壓滅菌15 分鐘。 

產(chǎn)品描述：

Rappaport vassiliadis 大豆蛋白胨肉湯（RVS）用于沙門氏菌的增菌，分離和推測鑒定的選擇性培養(yǎng)基。

該肉湯利用了沙門氏菌的所有特性：
1、抗高滲透壓能力
2、低pH 的生長能力
3、耐孔雀石綠
4、較低的營養(yǎng)要求

Rappaport vassiliadis 大豆蛋白胨肉湯（RVS）可用于沙門氏菌的增菌，分離和鑒定。它也可以被用來從人類糞便中分離出沙門氏菌，而不需要預(yù)先富集。

RVS是對RV培養(yǎng)基進行了改進，改進的特點是：

1、增加了磷酸氫二鉀，使得制成的肉湯的pH在存儲過程中更加穩(wěn)定；

2、明確了最佳的6水合氯化鎂的含量。

技術(shù)指導(dǎo)： 

食品和環(huán)境樣品

1、準備225ml 緩沖蛋白胨水CM0509 或緩沖蛋白胨水（ISO）CM1049
2、準備Rappaport vassiliadis 大豆蛋白胨肉湯（RVS）
3、加入25g 或者25ml 樣品溶于225ml 緩沖蛋白胨水中，37℃培養(yǎng)16-20 小時。取0.1ml 預(yù)富集的蛋白胨水加入到10ml RVS 中，42±1℃培養(yǎng)24 小時；
4、在MLCB 瓊脂 CM0783和亮綠瓊脂平板 CM0329上劃線培養(yǎng)。35℃培養(yǎng)18-24 小時。對菌落進行生化或者血清學(xué)檢測，以確定是否為沙門氏菌。方法參考ISO 6579:2002 +A1:2007

糞便樣本
不需要預(yù)富集。42℃下取一到兩個3mm 量置于10mlRVS 中，42±1℃培養(yǎng)24 小時，然后接種到選擇培養(yǎng)基上。

保存：

干粉培養(yǎng)基在10-30℃儲存，在保質(zhì)期內(nèi)使用

制成培養(yǎng)基置于2-8℃保存

外觀：

干粉培養(yǎng)基：稻草綠色干粉。
制成培養(yǎng)基：藍色溶液。

注意事項：

如果推測有鼠傷寒沙門氏菌的話，不應(yīng)用RVS培養(yǎng)基

為了達到最佳的恢復(fù)率，肉湯培養(yǎng)基應(yīng)在42℃±1℃下培養(yǎng)。

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亞硒酸胱氨酸肉湯（Selenite Cystine Broth）SCB培養(yǎng)基

從樣品中分離沙門氏菌的選擇性增菌肉湯

亞硒酸胱氨酸肉湯基礎(chǔ) CM0699：      

 *可根據(jù)操作標準自行調(diào)整配方

配制方法：

溶解10.0g 亞硒酸氫鈉LP0121 至1L 蒸餾水中，后添加19g 亞硒酸胱氨酸肉湯基礎(chǔ)CM0699，加熱至其完全溶解，將該混合溶液至于無菌蒸汽中15 分鐘。勿對其進行高壓滅菌。

據(jù)報道，亞硒酸氫鈉可能導(dǎo)致已懷孕試驗人員的流產(chǎn)，為了盡量減少任何由于亞硒酸氫鈉的干粉吸入而導(dǎo)致的實驗人員流產(chǎn)或胎兒畸形的風(fēng)險，OXOID 提供胱氨酸肉湯基礎(chǔ)作為附加方案以供試驗人員選擇使用。 

產(chǎn)品描述：

Selenite Cystine Broth 可以對糞便，食品和其他材料中的沙門氏菌進行增菌培養(yǎng)，它的配方符合AOAC關(guān)于食品中檢測沙門氏菌的標準，It is included among the standard methods media of the American Public Health Association，它同樣符合USP的配方。

儲存條件和保質(zhì)期：

干粉培養(yǎng)基置于10-30℃條件下保存，在保質(zhì)期之內(nèi)使用。
制成培養(yǎng)基避光置于2-8℃條件下避光保存。

外觀：

干粉培養(yǎng)基：麥色干粉
制成培養(yǎng)基：亮麥色溶液

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亞硒酸氫鈉 LP0121A

可用于Oxoid的亞硒酸鹽F肉湯基礎(chǔ) CM0395, 甘露醇亞硒酸鹽肉湯基礎(chǔ)CM0399 or 亞硒酸胱氨酸肉湯基礎(chǔ)CM0699，使用后必須用蓋上瓶子。

溶解4g亞硒酸氫鈉至1L蒸餾水中，將此溶液加入上述培養(yǎng)基基礎(chǔ)中。

注意，該產(chǎn)品吸入或吞食有毒，毒性能富集。

亞硒酸鹽F肉湯(Selenite F Broth)

從糞便樣品和食品中分離沙門氏菌的選擇性增菌培養(yǎng)基

亞硒酸鹽肉湯基礎(chǔ)（含乳糖） CM0395：

 *可根據(jù)操作標準自行調(diào)整配方

配制方法：

取4g亞硒酸氫鈉LP0121A至1L蒸餾水中，然后添加19g的亞硒酸鹽肉湯基礎(chǔ)，加熱溶解，混勻，分裝到試管等容器中，在沸水浴中加熱滅菌，或者在流動的蒸汽中滅菌，10分鐘，注意不要高壓滅菌。

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甘露醇亞硒酸鹽肉湯(Mannitol Selenite Broth)

亞硒酸鹽F肉湯的改良版，用于沙門氏菌的選擇性增菌

 甘露醇亞硒酸鹽肉湯基礎(chǔ) CM0399：

 *可根據(jù)操作標準自行調(diào)整配方

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連四硫酸鹽肉湯 （Tetrathionate Broth，簡稱TTB）

Muller-Kauffmann連四硫酸新生霉素肉湯基礎(chǔ)（MKTTn肉湯基礎(chǔ)） CM1182B

同新生霉素一起使用可作為沙門氏菌的選擇性增菌肉湯，原貨號CM1048B

配方表：

 *可根據(jù)操作標準自行調(diào)整配方        +相當于47.8g五水硫代硫酸鈉

配制方法：

將89.5g MKTTn 溶于1 升蒸餾水中，混勻并煮沸。冷卻至45℃。使用之前快速加入碘-碘溶液（制備方法：將氯化碘25g 溶于10ml 水中，加入20g 碘，然后用無菌水稀釋至100ml），加入4小瓶新生霉素添加劑SR0181E?；靹颍盅b到無菌容器中。

技術(shù)指導(dǎo)：

將BPW 培養(yǎng)基中的培養(yǎng)物取1ml 接種到10ml MKTTn 肉湯中，取0.1ml 接種到10ml RVS肉湯CM0866中。將MKTTn 肉湯37±1℃培養(yǎng)24±3 小時，RVS 肉湯41.5±1℃培養(yǎng)24±3 小時。

將兩肉湯中培養(yǎng)物接種到XLD 瓊脂上進行傳代培養(yǎng)，37±1℃培養(yǎng)24±3 小時。

沙門氏菌的鑒定還需要利用理化特征和血清學(xué)技術(shù)進行確定。完整方法參考ISO 6579:2002。 

保存條件及保質(zhì)期：

干粉培養(yǎng)基10-30℃保存，在有效期內(nèi)使用。
預(yù)制培養(yǎng)基室溫保存。加有碘-碘化合物溶液和新生霉素的培養(yǎng)基需立即使用。

外觀：

干粉培養(yǎng)基：淡綠色，粉狀
預(yù)制培養(yǎng)基：淡綠色，不透明渾濁液

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Muller-Kauffmann連四硫酸肉湯基礎(chǔ) CM0343B

一種用于分離沙門氏菌的改良的增菌肉湯，并可抑制變形桿菌的生長

配方表：

 *可根據(jù)操作標準自行調(diào)整配方       

配制方法：

取82g的干粉至1L蒸餾水中，煮沸。冷卻至45℃，在使用之前加入19ml碘溶液，和9.5ml的0.1%亮綠溶液，混勻，倒入無菌試管或者瓶子。

碘溶液： 20g碘，25g碘化鉀，100ml蒸餾水（將碘化鉀溶解于大約5ml蒸餾水中，加入碘，輕輕混勻使溶解，再將水的體積加至100ml）

0.1%亮綠溶液：0.1g亮綠，100ml蒸餾水，為溶解需100℃加熱30分鐘，在棕色瓶中避光保存。

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連四硫酸鹽肉湯基礎(chǔ) CM0029B

配方表：

 *可根據(jù)操作標準自行調(diào)整配方       

配制方法：

添加77g 培養(yǎng)基至1L 蒸餾水中，煮沸后冷卻至45℃，往培養(yǎng)基中添加20mL 碘液，使其充分混勻并將培養(yǎng)基分裝至10mL 量管中。制備好的培養(yǎng)基可在4℃條件下保存數(shù)周時間，如加入碘液后則需盡快使用。

碘溶液：碘6g，碘化鉀5g；蒸餾水20mL

儲存條件和保質(zhì)期：

干粉培養(yǎng)基置于10-30℃條件下保存，在保質(zhì)期之內(nèi)使用。
制成培養(yǎng)基(未添加碘溶液)置于2-8℃條件下保存。

外觀：

干粉培養(yǎng)基：白色，呈干粉狀。
制成培養(yǎng)基：白色不透明溶液。 

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連四硫酸鹽肉湯（美國配方）CM0671B

一種美國配方的TTB，符合美國藥典中對于沙門氏菌檢測的增菌培養(yǎng)基。其配方類同于國內(nèi)的培養(yǎng)基：四硫磺酸鈉亮綠培養(yǎng)基（TTB），或者叫四硫酸鈉煌綠增菌液。

配方表：

 *可根據(jù)操作標準自行調(diào)整配方       

配制方法：

添加46g 培養(yǎng)基至1L 蒸餾水中，煮沸使完全溶解，冷卻至45℃，往培養(yǎng)基中添加20mL 碘溶液，使其充分混勻并將培養(yǎng)基分裝至10mL 量管中。制備好的培養(yǎng)基可在4℃條件下保存數(shù)周時間，如加入碘液后則需盡快使用。

碘溶液：碘6g，碘化鉀5g；蒸餾水20mL

儲存條件和保質(zhì)期：

干粉培養(yǎng)基置于10-30℃條件下保存，在保質(zhì)期之內(nèi)使用。
制成培養(yǎng)基(未添加碘溶液)置于2-8℃條件下保存，添加碘液的培養(yǎng)基應(yīng)立即使用。

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沙門氏菌ONE肉湯（ONE Broth-Salmonella）

18小時內(nèi)對食品樣本中的沙門氏菌屬進行選擇性增菌，用在Oxoid Precis沙門氏菌快速培養(yǎng)檢測法中，不推薦用于其他方法的增菌。

Presis沙門氏菌快速培養(yǎng)方法是一種能在38小時內(nèi)對沙門氏菌進行恢復(fù)和計數(shù)的方法，分為增菌和瓊脂培養(yǎng)，先使用CM1091+SR0242進行增菌培養(yǎng)，再使用CM1092+SR0194沙門氏菌顯色瓊脂進行培養(yǎng)。

沙門氏菌ONE肉湯基礎(chǔ) CM1091：

配方表：

 *可根據(jù)操作標準自行調(diào)整配方   pH為加入添加劑后的pH    

SR0242E：1小瓶含2.7mg 的Novobiocin 新生霉素。

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